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高速離心機(jī)在質(zhì)粒提取中的重要應(yīng)用
時(shí)間：2018-05-07
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來(lái)源：四川蜀科儀器有限公司
質(zhì)粒是基因工程中最常用的運(yùn)載體，擔(dān)負(fù)著將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中的重要使命。高速離心機(jī)對(duì)從細(xì)菌中分離質(zhì)粒有非常重要的作用。以下是一實(shí)驗(yàn)室質(zhì)粒提取的步驟，使用蜀科TD-20高速離心機(jī)進(jìn)行操作：
1、將擴(kuò)增好的菌液重懸，轉(zhuǎn)入1.5mL離心管中；
2、用質(zhì)粒小量抽提試劑盒，按說(shuō)明書(shū)要求提取質(zhì)粒；
3、細(xì)菌高速離心1min,徹底去除上清；
4、加入250ulRB溶液，振蕩器充分懸浮細(xì)菌；
5、加入250ulLB溶液。立即上下顛倒10次，使細(xì)菌裂解，室溫，放置2min；
6、加入250ulNB溶液。立即上下顛倒10次，使之充分中和，室溫，放置2min；
7、室溫，15000rpm，蜀科高速離心機(jī)離心15min；
8、將吸附柱放入收集管內(nèi)，離心得到的上清轉(zhuǎn)移至吸附柱，室溫，15000rpm，蜀科高速離心機(jī)離心30s；
9、棄廢液，將吸附柱放入收集管，加入700uL WB溶液到吸附柱中，15000rpm，蜀科高速離心機(jī)離心30s；
10、重復(fù)上一操作；
11、將吸附柱放入干凈的1.5mL離心管中，加30-50uL預(yù)熱的Elution Buffer，室溫，放置2min，高速離心1min；
12、樣品進(jìn)行電泳檢測(cè)：1%瓊脂糖凝膠電泳，上樣量為2uL，紫外燈下觀察，最明亮的帶為超螺旋形式，可以在一定程度上表明提取質(zhì)粒的純度。
質(zhì)粒提取是基因工程最基礎(chǔ)的一步，高速離心機(jī)的運(yùn)用非常頻繁，蜀科高速離心機(jī)全系采用轉(zhuǎn)頭識(shí)別技術(shù)，有效防止轉(zhuǎn)頭超速運(yùn)轉(zhuǎn)，保護(hù)機(jī)器和人員安全，技術(shù)性能位居行業(yè)前列，歡迎選購(gòu)！
2、用質(zhì)粒小量抽提試劑盒，按說(shuō)明書(shū)要求提取質(zhì)粒；
3、細(xì)菌高速離心1min,徹底去除上清；
4、加入250ulRB溶液，振蕩器充分懸浮細(xì)菌；
5、加入250ulLB溶液。立即上下顛倒10次，使細(xì)菌裂解，室溫，放置2min；
6、加入250ulNB溶液。立即上下顛倒10次，使之充分中和，室溫，放置2min；
7、室溫，15000rpm，蜀科高速離心機(jī)離心15min；
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10、重復(fù)上一操作；
11、將吸附柱放入干凈的1.5mL離心管中，加30-50uL預(yù)熱的Elution Buffer，室溫，放置2min，高速離心1min；
12、樣品進(jìn)行電泳檢測(cè)：1%瓊脂糖凝膠電泳，上樣量為2uL，紫外燈下觀察，最明亮的帶為超螺旋形式，可以在一定程度上表明提取質(zhì)粒的純度。
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